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細(xì)胞的活性鑒定在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)上具有很重要的意義。它是體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中常用的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。不同的細(xì)胞活性鑒定方法有各自不同具體的反應(yīng)機(jī)理，但無(wú)論采用哪種方法，都利用了死細(xì)胞和活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異。常用的方法有直接染色法，克隆形成試驗(yàn)，比色法等。下面我們就簡(jiǎn)單的了解一下常用的細(xì)胞活性檢測(cè)方法的原理，特點(diǎn)，以及各自的優(yōu)缺點(diǎn)。一、染色計(jì)數(shù)法化學(xué)染色法染色計(jì)數(shù)法是細(xì)胞培養(yǎng)中檢查細(xì)胞死活zui常用的方法,直接利用死細(xì)胞和活細(xì)胞對(duì)染料的不同親和力,檢查細(xì)胞活性,能在光學(xué)顯微鏡下...

蛋白定量是生物學(xué)研究中不可能或缺的一個(gè)步驟，根據(jù)其目的可分為蛋白質(zhì)的“總定量”和特定蛋白的“個(gè)別定量”。在蛋白質(zhì)的提取、純化和分析過(guò)程中，蛋白質(zhì)的定量隨處可見(jiàn)。比如在裂解細(xì)胞之后，應(yīng)對(duì)各個(gè)樣品中的蛋白進(jìn)行定量，確保下游實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)平行度；在電泳之前進(jìn)行定量，保證上樣量一致，這樣目的條帶含量的變化才有說(shuō)服力。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)復(fù)雜、功能各一、分子量存在巨大差異，目前還沒(méi)有一個(gè)理想且通用的蛋白定分析方法。如今最常見(jiàn)的方法主要有以下幾種：BCA法測(cè)定bicinchoninincacid01...

即使蛋白酶對(duì)細(xì)胞功能很重要，但你也有不想見(jiàn)到它們的時(shí)候。比如，在純化蛋白質(zhì)的時(shí)候，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧，特別是低豐度蛋白。如今，市場(chǎng)上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇，幫助你在必要時(shí)停止蛋白酶的活性。為了對(duì)付細(xì)胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶，抑制劑的選擇也在不斷增加。目前，主要有四種類(lèi)型的蛋白酶，根據(jù)他們活性位點(diǎn)中的氨基酸命名：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對(duì)一種蛋白酶，也可以是廣譜的。人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白...

1.什么是感受態(tài)細(xì)胞（1）感受態(tài)細(xì)胞其實(shí)是一種暫時(shí)性改變一下細(xì)胞膜的通透性，以利于外源DNA（如質(zhì)粒）進(jìn)入細(xì)胞。這樣的活細(xì)胞稱(chēng)為感受態(tài)細(xì)胞。（2）主要原理其實(shí)就是通過(guò)特殊的方法處理使細(xì)胞，使細(xì)胞膜的通透性變大，直觀的說(shuō)，使得細(xì)胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源DNA（如重組質(zhì)?；蛘哌\(yùn)載體）進(jìn)入感受態(tài)的細(xì)胞。2.感受態(tài)細(xì)胞制備原理在基因克隆技術(shù)中，轉(zhuǎn)化特指將質(zhì)粒DNA或以其為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌體內(nèi)，使之獲得新的遺傳特性的一種方法。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)...

01電泳的發(fā)展簡(jiǎn)史1809國(guó)外物理學(xué)家Рейсе發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1909將膠體離子在電場(chǎng)中的移動(dòng)稱(chēng)為電泳1937創(chuàng)造了Tiselius電泳儀，建立了研究蛋白質(zhì)的移動(dòng)界面電泳方法，并證明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白組成的。1948Wieland和Fischer重新發(fā)展了以濾紙作為支持介質(zhì)的電泳方法，對(duì)氨基酸的分離進(jìn)行過(guò)研究。1950Durrum用紙電泳進(jìn)行了各種蛋白質(zhì)的分離以后，開(kāi)創(chuàng)了利用各種固體物質(zhì)(如各種濾紙、醋酸纖維素薄膜、瓊脂凝膠、淀粉凝膠等)作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳方...

對(duì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室新手來(lái)講，提到ChIP，您可能沒(méi)聽(tīng)過(guò)這個(gè)詞，他的全稱(chēng)叫染色質(zhì)免疫沉淀(ChromatinImmunoprecipitation),今天就帶大家來(lái)學(xué)習(xí)一下CHIP實(shí)驗(yàn)的相關(guān)知識(shí)，咱們主要從CHIP的定義、原理、步驟以及應(yīng)用以下幾點(diǎn)給大家分析介紹，希望能幫助大家更好的做CHIP實(shí)驗(yàn)什么叫ChIP？染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）用于分析基因組中特定染色體區(qū)域中組蛋白乙?；癄顟B(tài)的實(shí)驗(yàn)方法，被用來(lái)研究細(xì)胞內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用。是目前確定與特定蛋白結(jié)合的基因組區(qū)域或確定與特定...

上面這張圖，大家有沒(méi)有一種熟悉的感覺(jué)，沒(méi)錯(cuò)，就是你想的核酸提取實(shí)驗(yàn)流程圖。相信大家作剛開(kāi)始做為實(shí)驗(yàn)小白，剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，學(xué)的第一個(gè)實(shí)驗(yàn)就是提質(zhì)粒了。當(dāng)時(shí)剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室，看著師兄做實(shí)驗(yàn)的樣子好酷呀！跟在師兄后面，認(rèn)真的對(duì)每一步的步驟都做好筆記，后來(lái)才發(fā)現(xiàn)你只不過(guò)是做了一份手抄版的說(shuō)明書(shū)。接下來(lái)的N年里，除了轉(zhuǎn)化、涂板、挑單克隆、搖菌、提質(zhì)粒、酶切、連接，此時(shí)此刻，只想有個(gè)提取質(zhì)粒的機(jī)器人。因?yàn)樽龆嗔酥?，你就?huì)像個(gè)機(jī)器人一樣，最后甚至連提取的原理都會(huì)遺忘了。所以，今天小編就來(lái)給大家講...

一、細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法。1光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡2熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡3透射電子顯微鏡觀察二、磷脂酰絲氨酸外翻分析（AnnexinV法）磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中(圖3)。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親...

各位小伙伴們，我們又見(jiàn)面了好久沒(méi)有更新一些技術(shù)性的文章了，今天我們就來(lái)講講蛋白質(zhì)技術(shù)，對(duì)，沒(méi)錯(cuò)，就是Western免疫印跡，這個(gè)實(shí)驗(yàn)相信各位小伙伴們，也是耳熟能詳了，但是呢，還是有不少下伙伴們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中，會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題，所以為了解惑各位小伙伴們，今天我們就出一期關(guān)于Western免疫印跡實(shí)驗(yàn)的知識(shí)點(diǎn)，其中包括它的概念、原理、應(yīng)用場(chǎng)景、操作步驟以及注意事項(xiàng)等。Western免疫印跡是什么Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)...

大家在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候，想必大家也一定遇到過(guò)細(xì)胞狀態(tài)差這種情況，但是細(xì)胞狀態(tài)差，有很多種原因造成？細(xì)胞狀態(tài)很差，常常出現(xiàn)的現(xiàn)象是：細(xì)胞邊緣不清晰、細(xì)胞不飽滿(mǎn)、折光性差、背景比較臟、黑點(diǎn)很多、細(xì)胞碎片多（細(xì)胞凋亡后的細(xì)胞碎片）、單個(gè)細(xì)胞內(nèi)有空泡（凋亡）且空泡比較多；如果細(xì)胞出現(xiàn)老化，也就是細(xì)胞比較扁平、增殖減緩、細(xì)胞核體積增大、細(xì)胞突觸變多，此時(shí)觀察到的細(xì)胞狀態(tài)也是不正常的。所以，除了考慮血清和細(xì)菌污染的問(wèn)題，細(xì)胞老化也不容忽視~首先，我們要知道什么是細(xì)胞老化？何為細(xì)胞老化？188...